ABSTRACT: The present study identified virulence genes and pathological changes caused by Escherichia coli in chicken carcasses condemned for airsacculitis and assessed if the histopathological examination and polymerase chain reaction (PCR) were effective for studies like this. Trachea, liver, and lung were collected from 30 chickens with suspected airsacculitis that has been condemned in the inspection line. The samples were analyzed by PCR to simultaneously identify two virulence genes (iss and tsh genes) and for histopathological testing. PCR efficiently genotypically characterize the E. coli isolates, where the virulence genes iss and tsh were found in three birds simultaneously. The histopathological examination detected a predominance of heterophils and mononuclear cells in the trachea (100%), lung (90%), and liver (13.3%). The liver was the organ where practically no alteration was diagnosed. The results of multiplex PCR for the tsh and iss virulence genes indicate the great potential of the approach in the characterization of E. coli isolates. Unspecific identification did not occur, thus making it necessary to use technologies for the identification and prevention of this agent in aviaries and poultry abattoirs.

RESUMO: O objetivo do presente estudo foi identificar genes de virulência e alterações patológicas provocadas por Escherichia coli em carcaças de frango condenadas por aerossaculite e se o exame histopatológico e uma Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) são eficazes para os estudos dessa natureza. Para isso, foram coletados traqueia, fígado e pulmão de 30 frangos condenados na linha de inspeção, com suspeita de aerossaculite. As amostras foram submetidas a PCR para a identificação de dois genes de virulência de modo simultâneo (genes iss e tsh) e ao teste histopatológico. A PCR foi eficiente para caracterizar genotipicamente os isolados de E. coli, em que se constatou em três aves os genes de virulência iss e tsh simultaneamente. No exame histopatológico detectou-se a predominância de heterófilos e mononucleares na traqueia 100%, no pulmão 90% e no fígado 13,3%. O fígado foi o órgão onde praticamente não foi diagnosticada nenhuma alteração. Diante dos resultados obtidos, foi possível observar que a PCR multiplex para os genes de virulência tsh e iss apresenta um grande potencial na caracterização de isolados de E. coli, já que não gerou identificação inespecífica, com isso faz-se necessária a utilização de tecnologias para identificação e prevenção desse agente nos aviários e matadouros avícolas.

RESUMO A doença de Chagas, enfermidade causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, tem sido relacionada com frequência à transmissão oral pelo consumo de açaí. Métodos moleculares que fornecem uma identificação rápida e precisa do patógeno para a detecção da presença do parasita são de extrema importância para a detecção da presença do parasita neste alimento. Este estudo teve como objetivo otimizar a detecção de DNA de T. cruzi em polpa de açaí por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR). Foram preparadas várias diluições das formas tripomastigotas de T. cruzi DTU TcI cultivadas em meio de cultivo Liver Infusion Tryptose. O DNA de T. cruzi foi extraído das células e submetido à PCR. Posteriormente, as diluições da cultura foram adicionadas às polpas de açaí para avaliar o limite de detecção do novo ensaio de PCR otimizado. Mostramos que nosso ensaio pode detectar DNA de T. cruzi em polpas de açaí na concentração de 1.08 × 10-10 ng µL-1. Concluímos que a metodologia desenvolvida se mostra eficaz e pode ser uma ferramenta importante para a detecção de contaminação por T. cruzi em açaí.

ABSTRACT Chagas disease, caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, has often been linked to oral transmission through açai consumption. Molecular methods that allow fast and accurate identification of the pathogen are important for the detection of the presence of the parasite in this food. This study aimed to optimize polymerase chain reaction (PCR)-based detection of T. cruzi DNA in açai pulp. Several dilutions of T. cruzi DTU TcI trypomastigote forms were cultured in liver infusion tryptose (LIT) medium. Trypanosoma cruzi DNA was extracted from the cells and subjected to PCR. Subsequently, culture dilutions were added to açai pulp to evaluate the detection threshold of the optimized PCR assay. We demonstrate that our assay can detect T. cruzi DNA in açai pulp at a concentration of 1.08 × 10-10 ng µL-1. We conclude that our optimized protocol is effective and can be used as an important tool for the detection of T. cruzi contamination in açaí.

Resumo A pasteurização compreende uma etapa de suma importância para eliminação de patógenos no leite e, a fim de manter a inocuidade do alimento, o controle desse processo é fundamental do ponto de vista da segurança alimentar. Assim, o objetivo deste trabalho foi verificar a aplicabilidade e a sensibilidade dos procedimentos de detecção da fosfatase alcalina em leite bovino, bubalino e caprino, experimentalmente pasteurizados e fraudados com alíquotas de leite cru. O leite foi pasteurizado e acrescido de leite cru nas seguintes percentagens: 0,1%; 0,25%; 0,5%; 0,75%; 1%; 3%; 5% e 7%; 10%; 50%, além da adoção dos controles: negativo (leite pasteurizado) e positivo (leite cru). Os métodos utilizados foram: a metodologia oficial da legislação brasileira, tiras colorimétricas e kit de reagentes. Os resultados demonstraram que nos testes realizados com leite bubalino houve uma discreta reação quando utilizados o kit de reagentes e as tiras colorimétricas, ao passo que a metodologia segundo a legislação se apresentou pouco eficiente. Para o leite caprino a enzima não foi detectada nas amostras de leite testadas por nenhuma das metodologias adotadas. Já para o leite bovino o procedimento mais sensível para detectar porções mínimas de leite cru foi o da legislação brasileira. A metodologia da legislação brasileira é a que possui maior sensibilidade para acusar a presença da fosfatase alcalina no leite bovino, e os procedimentos para o controle da pasteurização em leite bovino não possuem a mesma eficácia para os leites bubalino e caprino que, neste caso, precisam ser otimizadas.

Abstract Pasteurization is a very important step for eliminating pathogens in milk and keeping the food-safe, the control of this process is fundamental from the point of view of food safety. Thus, the objective of this work was to verify the applicability and sensitivity of the alkaline phosphatase detection procedures in bovine, buffalo, and goat milk, experimentally pasteurized and defrauded with raw milk aliquots. The milk was pasteurized and added raw milk in the following percentages: 0.1%; 0.25%; 0.5%; 0.75%; 1%; 3%; 5% and 7%, 10%, 50%, besides the adoption of the controls: negative (pasteurized milk) and positive (raw milk). The methods used were: the official methodology of the Brazilian legislation, colorimetric strips, and a reagent kit. The results showed that in the tests performed with buffalo milk, there was a slight reaction when using the reagent kit and the colorimetric strips, while the methodology according to the legislation was inefficient. For goat milk, the enzyme was not detected in the milk samples tested by any of the adopted methodologies. For bovine milk, the most sensitive procedure to detect minimal portions of raw milk was the Brazilian legislation. The methodology of the Brazilian legislation is the one with the highest sensitivity to acknowledge the presence of alkaline phosphatase in bovine milk and the procedures for the control of pasteurization in bovine milk do not have the same efficacy for buffalo and goat milk that, in both it is necessary to be optimized.

RESUMO: O leite bubalino é rico em nutrientes e pode servir de substrato para a proliferação de micro-organismos. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar a cinética de crescimento de Salmonella Typhimurium e Listeria monocytogenes em leite bubalino, em diferentes condições de processamento e armazenamento. Para isso, utilizaram-se amostras de leite cru e pasteurizado, que foram inoculadas com 1 UFC/25 mL de cada bactéria separadamente e em conjunto. Após a contaminação, as amostras foram armazenadas nas temperaturas de 8 ºC e 37 ºC e realizadas contagens bacterianas em 24, 48 e 168h. Além disso, foi acompanhado o crescimento da microbiota acompanhante, o pH e o efeito dessas variáveis sobre a cinética de crescimento dos micro-organismos. Os patógenos testados conseguiram se proliferar na maioria das condições testadas, atingindo altos títulos durante todo o período experimental. Na temperatura de 37 ºC, houve uma diminuição do pH e um aumento da microbiota acompanhante, o que interferiu na curva de crescimento microbiana. Observou-se também que o leite pasteurizado e submetido a 8 ºC possibilitou melhores condições para a multiplicação das bactérias. Sendo assim, concluiu-se que cuidados durante toda a cadeia de produção, armazenamento e comercialização do leite devem ser adotados para garantir a segurança microbiológica desse alimento.

ABSTRACT: Buffalo milk is rich in nutrients and can serve as a substrate for the proliferation of microorganisms. Thus, the objective of the present study was to evaluate the growth kinetics of Salmonella Typhimurium and Listeria monocytogenes in buffalo milk under different processing and storage conditions. Samples of raw and pasteurized milk were inoculated with 1 CFU of each bacterium, separately and together, per 25 mL. After contamination, samples were stored at 8 °C or 37 °C, and bacterial counts were performed at 24, 48, and 168 h. In addition, the accompanying microbiota growth, pH, and the effect of these variables on the growth kinetics of microorganisms were monitored. The pathogens tested were able to proliferate under most conditions tested, reaching high titers throughout the experimental period. At 37 °C, there was a decrease in pH and an increase in the accompanying microbiota that interfered with the microbial growth curve. It was also observed that pasteurized milk subjected to 8 °C provided better conditions for the multiplication of bacteria. Therefore, it was concluded that care throughout the production chain, storage, and commercialization of milk must be adopted to guarantee the microbiological safety of this food.

RESUMO: O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficácia da PCR multiplex na detecção da adulteração por adição e/ou substituição de carne bubalina em carne moída bovina, comercialmente disponível. A fim de determinar o limite de detecção da técnica, carnes moídas bovinas fraudadas intencionalmente foram fabricadas em triplicata e, adicionalmente, concentrações conhecidas de DNA das espécies Bostaurus e Bubalusbubalis foram diluídos. Ao mesmo tempo, 91 amostras de carne moída comercializadas como sendo de origem bovina foram coletadas em diferentes comércios na região Norte do Brasil e a PCR multiplex proposta foi realizada. Os resultados demonstraram que o DNA bubalino foi detectado em 17,5% das amostras de carne moída coletadas. Concluiu-se que a PCR multiplex é uma técnica eficaz, capaz de detectar a incorporação de carne moída bubalina em percentagens que variaram de 10 a 100%, e a incorporação de carne bovina em percentagens que variaram de 0,1 a 100% em amostras de carne moída.

ABSTRACT: The aim of the present study was to assess the efficacy ofmultiplex PCR in detecting the adulterationof commercially available ground beefvia addition and/orsubstitution ofground buffalo meat. Experimentally adulterated ground beefsamples were prepared in triplicate, and dilutions of DNA from Bos taurus and Bubalusbubalis were prepared to determine the detection limit of the method. Concurrently, 91 ground meatsamples sold as “ground beef” were collected from differentstores in northern Brazil andanalyzed bymultiplex PCR. Buffalo DNA was detected in 17.5% of the collected ground meat samples.Our results showed that multiplex PCR is an efficient method for detectingthe incorporation of groundbuffalo meatatpercentages ranging from 10 to 100% and the incorporation of beef at percentages ranging from0.1 to 100% intoground meat samples.

A neosporose é uma doença causada pelo protozoário Neospora caninum que leva a perdas econômicas importantes em muitos países. No presente estudo, é descrita a utilização da proteína recombinante NcSRS2 de N. caninum expressa em Pichia pastoris em um ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) para o diagnóstico de infecção por Neospora em ovelhas e cães. Observou-se, que utilizando-se um ELISA, o teste produziu uma especificidade de 94,5% e uma sensibilidade de 100% para ovinos; e uma especificidade de 93,3% e sensibilidade de 100% para cães. Uma maior sensibilidade foi observada em relação à IFI que foi confirmada por Western blot. Os resultados deste estudo sugerem que a proteína recombinante expressa em P. pastoris é bom antígeno para ser utilizado no diagnóstico imunológico para detectar N. caninum em duas espécies importantes expostas a esta parasitose

Neosporosis is a disease caused by the protozoon Neospora caninum that leads to significant economic losses in many countries. In the present study, we report on use of the recombinant protein NcSRS2 of N. caninum expressed in Pichia pastoris in an indirect immunoenzymatic assay (ELISA) for diagnosing neosporosis infection in sheep and dogs. We observed that the ELISA test yielded specificity of 94.5% and sensitivity of 100% for sheep and specificity of 93.3% and sensitivity of 100% for dogs. We observed that the sensitivity was higher than shown by the indirect fluorescent antibody test, and this was confirmed by means of Western blot. The results from this study suggest that the recombinant protein expressed in P. pastoris is a suitable antigen for use in immunodiagnosis to detect N. caninum in two important species exposed to this parasitosis.